1、開機(jī)
打開儀器背面電源開關(guān),儀器顯示開機(jī)畫面,按畫面提示操作,進(jìn)行檢測之前先校正儀器零點(diǎn)。
2、試劑配制
2.1、緩沖液:取1包緩沖劑加入500mL蒸餾水或純凈水中,攪拌溶解制成磷酸緩沖液(pH7.6), 常溫保存。
2.2、顯色劑:取1瓶顯色劑加25mL緩沖液溶解,使用時(shí)取100μL,4℃冰箱保存。
2.3、底 物:取1瓶底物加12.5mL蒸餾水或純凈水溶解,使用時(shí)取100μL,4℃冰箱保存;或取1瓶底物加2.5mL蒸餾水或純凈水溶解 ,使用時(shí)取20μL,4℃冰箱保存。
2.4、 膽堿酯酶:酶制劑無需配制,可直接取用,使用時(shí)取100μL,4℃冰箱保存。
3、樣品提取
取2g果蔬樣品(塊莖類取4g),葉菜剪成25px左右見方的碎片,塊莖類取橫截面樣品或取其表皮,放入三角瓶中,加入10mL緩沖液,振蕩1~2min ,倒出提取液,靜置2min,待測。若提取液混濁或雜質(zhì)太多可過濾后再測。
4、測試
4.1、 對照測試:于反應(yīng)瓶中加入2.5mL緩沖液,再分別加入100μL酶液和顯色劑,混勻,靜置反應(yīng)10min后加入100μL(或20μL)底物,搖勻并立即倒入比色杯中,及時(shí)放入儀器的測量室通道中。按<對照>鍵,顯示屏延遲設(shè)定秒數(shù)后,測量時(shí)間開始,計(jì)時(shí)完畢,顯示屏顯示對照吸光度增量(ΔΑ),并提示完成。在進(jìn)行對照測試時(shí),其他通道可同時(shí)進(jìn)行樣品測試。
4.2、樣品測試:于反應(yīng)瓶中加入2.5mL待測液,再分別加入100μL酶液和顯色劑,混勻,靜置反應(yīng)10min后加入100μL(或20μL)底物,搖勻并立即倒入比色皿中,及時(shí)放入儀器的測量室通道。按<樣品>鍵,顯示屏下方延遲設(shè)定秒數(shù)后,測量時(shí)間開始,計(jì)時(shí)完畢,顯示屏顯示樣品吸光度增量(ΔΑ)及抑制率,并提示合格或超標(biāo)。數(shù)據(jù)可進(jìn)行自動保存,如有需要按<打印>鍵打印。